48T/96T 人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書
產(chǎn)品名稱:48T/96T 人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書
產(chǎn)品型號:48T/96T
產(chǎn)品廠商:上海古朵生物科技有限公司
簡單介紹
48T/96T 人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書的詳細(xì)介紹
中文名:人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒
英文名稱:Human androgen receptor (AR) ELISA kit
供應(yīng)商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個月
種屬/Organism:Human/人
指標(biāo)名稱/Other Names:AR
檢測方法/Method:Sandwich-ELISA/雙抗體夾心ELISA
檢測范圍/Detection Range:0.31-20 ng/mL
靈敏度/Sensitivit:0.19 ng/mL
檢測樣品/Sample Type:Serum, Plasma, Other biological fluids/血清、血漿等其它生物樣品
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人AR抗體包被于酶標(biāo)板上,實驗時標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品中的AR會與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人AR抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素??谷薃R抗體與結(jié)合在包被抗體上的人AR結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變黃。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,AR濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中AR的濃度。
標(biāo)本收集:
血清:全血標(biāo)本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管。血漿:抗凝劑推薦使用EDTA,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標(biāo)本。其它生物標(biāo)本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測標(biāo)本應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。標(biāo)本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),避免反復(fù)凍融,6個月內(nèi)進(jìn)行檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù))。
人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書 使用方法:
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
人雄激素受體(AR)ELISA試劑盒說明書 注意事項:
1,封閉中的蛋白會非特異性將ELISA板子中沒有結(jié)合包被物的位點封閉掉,這樣之后加入的抗原或者抗體就不會再和板子發(fā)生非特異性的結(jié)合.使ELISA的結(jié)果更加的準(zhǔn)確品
2,固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
3,包被抗體的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定然后觀察陽性標(biāo)本的OD值。
4,酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定,然后再固定其它條件,后在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
5, ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),如 TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。
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