人不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒說明書，檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。

中文名：人不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒
供應(yīng)商：上海古朵
種屬:人ELISA試劑盒
檢測(cè)波長:450 nm
所需樣本體積: 50-100ul
保存：2-8℃,避光保存
有效期：六個(gè)月
種屬：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、豬犬、牛羊、雞鴨、植物ELISA試劑盒等
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清，血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本。



人不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒說明書 使用原理：
1，ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。
2，結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。
3，在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。
4，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。
5，此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
6，由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。



人不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒說明書 標(biāo)本要求：
1，本公司ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中所測(cè)指標(biāo)的水平
2，標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
3，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
4，不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。


人不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)ELISA試劑盒說明書 在實(shí)驗(yàn)中的幾個(gè)重要的操作步驟:
一、加樣
1.1 樣品稀釋液少加，或血清多加，都會(huì)引起本底增高。對(duì)于間接法來說，受上述兩個(gè)因素影響更大。因?yàn)檠逯惺軝z的特異性IgG 只占總IgG 中的一小部分。IgG 的吸附性很強(qiáng)，非特異IgG 可直接吸附到固相載體上，有時(shí)也可吸附到包被抗原的表面。這些非特異的IgG均可以和酶標(biāo)二抗發(fā)生反應(yīng)而造成較高陰性本底或假陽性。如果加入的血清過多，高于規(guī)定的稀釋倍數(shù)，必將帶來陰性高值。
1.2 酶結(jié)合物的不正確加入。一般來講，酶也有一定的非特異吸附，將包被好的酶聯(lián)板再封閉，一方面也可避免酶的非特異性吸附。通常每孔加入的封閉液為120μl。如果加入的酶多于120μl 或加在較高的孔壁上或孔口，也會(huì)引起本底升高或假陽性。



二、溫育
2.1 由于試劑盒確定的一定溫度下的反應(yīng)時(shí)間并不是反應(yīng)的終點(diǎn)，升高反應(yīng)的溫度，會(huì)加快反應(yīng)，同樣增加時(shí)間會(huì)延長反應(yīng)，這樣得到的反應(yīng)程度會(huì)比試劑盒確定的反應(yīng)程度多，也會(huì)引起陰性高值或假陽性。
2.2 由于試劑盒通常設(shè)定的反應(yīng)溫度為37 度，在這個(gè)溫度下放置30 分鐘，蒸發(fā)的水分會(huì)很多，對(duì)于整個(gè)反應(yīng)體系來講，各種反應(yīng)物的濃度會(huì)不斷增加，這樣必會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)后的值升高。因此溫育時(shí)應(yīng)蓋上膠貼。
2.3 試劑盒在設(shè)計(jì)時(shí)，反應(yīng)是在靜置條件下完成的，如果反應(yīng)改變?yōu)檎駝?dòng)條件，會(huì)加快分子的熱運(yùn)動(dòng)，增加反應(yīng)的機(jī)會(huì)。
2.4 試劑盒的溫育過程是在培養(yǎng)箱中進(jìn)行，這和水浴的條件不一樣。水浴可是酶聯(lián)板迅速升溫，但較難將溫度控制在較穩(wěn)定的溫度，往往高于37 度，同樣會(huì)引起高值陰性。



三、洗板
3.1 各個(gè)廠家使用的洗液配方是不同的，是根據(jù)各自試劑的條件配制的，采用不配套的洗液常會(huì)得到不正常的反應(yīng)結(jié)果，包括本底過高。本公司的洗液采用獨(dú)特的洗滌系統(tǒng)不能和其它公司的試劑盒混用。
3.2 試劑盒中提供的洗液是濃縮的，應(yīng)該稀釋到規(guī)定的倍數(shù)使用，過多稀釋洗液，會(huì)影響洗液的效果，而使反應(yīng)的本底過高。
3.3 稀釋洗液的水應(yīng)該是新鮮的蒸餾水，電導(dǎo)率小于1.2μs。如果水中含有過多的Ca2+、Mg2+，這些離子會(huì)占用表面活性劑，影響洗滌效果。
3.4 洗板時(shí)，應(yīng)每孔加滿洗液，如果加入的洗液液量不夠，對(duì)洗滌的效果影響也是很大的。本公司的酶聯(lián)板板孔為400μl，比別的廠家的板孔大，因此洗了別公司的板后要及時(shí)調(diào)整液量，以避免加液量不滿。
3.5 洗板的次數(shù)不夠孔內(nèi)多余的抗原（抗體）或酶結(jié)合物不能徹底去除，也會(huì)因此本底升高。
3.6 洗板的強(qiáng)度和洗板的浸泡時(shí)間是密切相關(guān)的。洗板機(jī)不同，使用的泵不同，液體加入時(shí)的沖力不同。如果加入洗液的沖力不大，也沒有設(shè)定浸泡時(shí)間，同樣會(huì)使結(jié)果的A 值偏高。
3.7 洗板完畢后，要進(jìn)行拍板，盡量采用質(zhì)量好的毛巾和吸水紙，使用易掉渣的紙，紙屑會(huì)留在板孔中，由于紙屑中含有氧化劑而造成高值陰性。


四、顯色
4.1加A、B 液準(zhǔn)確，順序不能顛倒，要及時(shí)終止顯色。終止后要在3 分鐘內(nèi)讀數(shù)，否則強(qiáng)陽性會(huì)變低。