48t/96t 人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒
產(chǎn)品名稱:48t/96t 人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒
產(chǎn)品型號(hào):48t/96t
產(chǎn)品廠商:上海古朵生物科技有限公司
簡(jiǎn)單介紹
48t/96t 人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒的詳細(xì)介紹
中文名:人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒
英文名稱:Human Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA KIT
供應(yīng)商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個(gè)月
使用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床。
產(chǎn)品用途:用于測(cè)定血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。
人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟 :
1、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50?l,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40?l,然后再加待測(cè)樣品10?l(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
2、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
重復(fù)5次,拍干。
5、加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50?l,空白孔除外。
6、顯色:每孔先加入顯色劑A50?l,再加入顯色劑B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止:每孔加終止液50,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
8、測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
◆可逆性:
抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡,其反應(yīng)式為:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力(affinity)是抗原抗體間的固有結(jié)合力,可以用平衡常數(shù)K表示:
K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab]
◆適比例:
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復(fù)合物(沉淀)的量。曲線的高峰部分是抗原抗體比例合適的范圍,稱為等價(jià)帶。在等價(jià)帶前后分別為抗體過(guò)剩帶和抗原過(guò)剩帶。如果抗原或抗體度過(guò)剩,則無(wú)沉淀物形成,在免疫測(cè)定中稱為帶現(xiàn)象??贵w過(guò)量稱為前帶,抗原地過(guò)量稱為后帶。在用免疫學(xué)方法測(cè)定抗原時(shí),應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量,否則測(cè)得的量會(huì)小于實(shí)際含量,甚至出現(xiàn)假陰性。
人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟 注意事項(xiàng):
1,封閉中的蛋白會(huì)非特異性將ELISA板子中沒(méi)有結(jié)合包被物的位點(diǎn)封閉掉,這樣之后加入的抗原或者抗體就不會(huì)再和板子發(fā)生非特異性的結(jié)合.使ELISA的結(jié)果更加的準(zhǔn)確品
2,固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
3,包被抗體的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定然后觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。
4,酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定,然后再固定其它條件,后在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
5, ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),如 TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。
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