48t/96t 植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒實驗方法
產(chǎn)品名稱:48t/96t 植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒實驗方法
產(chǎn)品型號:48t/96t
產(chǎn)品廠商:上海古朵生物科技有限公司
簡單介紹
48t/96t 植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒實驗方法的詳細介紹
中文名:植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒
供應(yīng)商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2-8℃低溫保存
有效期:6個月
適用范圍:僅限科研實驗,不作臨床使用。
用途:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
特點:敏感性高、特異性強、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡便。
特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時常見到一些錯誤的結(jié)果。
引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒包含以下各組分:
(1)結(jié)合物及標本的稀釋液;
(2)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
(3)酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);
(4)酶的底物;
(5)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),ELISA試劑盒參考標準品和控制血清(定量測定中);
(6)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
植物赤霉素(GA)ELISA檢測試劑盒標本采集及保存:
1、 新鮮植物組織請在液氮中充分研磨;
2、 加進樣品體積3倍的提取液(10% TCA), 置于-20 過夜;
3、 請于4 ,8000rpm,離心1小時,棄上清,收集沉淀;
4、 沉淀加進等體積的冰浴丙酮,混勻后于4 離心(8000rpm,15分鐘),棄上清并真空干燥,保存?zhèn)溆茫?br /> 5、 上樣前加進裂解液(2.7g 尿素,0.2g CHAPS,溶于往離子水中至終體積5ml),混勻后室溫放置30分鐘,然后4 離心(8000rpm,15分鐘),取上清并暫時保存于4 待用。
注:以上標本均應(yīng)密封保存,4 保存應(yīng)小于1周,-20 不應(yīng)超過1個月,-80 不應(yīng)超過2個月;
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒若干特點:
專一性強:抗原與抗體的免疫反應(yīng)是專一反應(yīng),而免疫酶技術(shù)以免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),所檢測的對象是抗原(或抗體),使用的抗體除標記了酶以外,與普通抗體的免疫反應(yīng)特性并無多大差別。
靈敏度高:由于抗體聯(lián)結(jié)上了酶,因此,借助于酶與底物的顯色反應(yīng),顯示抗原與抗體的結(jié)合,大大提高了檢測的靈敏性,使檢測水平接近放射免疫測定法。
樣品易保存:經(jīng)過酶反應(yīng)顯示的有色產(chǎn)物大多比較穩(wěn)定,因此有利于樣品的保存。
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒實驗方法:
1、加入待測標本每孔0.05ml,并設(shè)HBsAg陽性對照2孔,HBsAg陰性對照2孔,空白對照1孔,然后加入酶結(jié)合物每孔1滴(0.05ml、空白對照孔不加),充分混勻后置37℃孵育30分鐘。
2、洗板:棄去反應(yīng)條孔內(nèi)液體、拍干、用洗滌液注滿每孔,棄去拍干,反復(fù)五次后拍干。
3、顯色劑:先加顯色劑A每孔1滴(0.05ml),然后再加顯色劑B每孔1滴(0.05ml),混勻,37℃孵育10分鐘。
4、每孔加終止液1滴(0.05ml),混勻。
注意事項:
1、試劑盒置2℃~8℃保存。
2、使用前試劑應(yīng)搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加。
3、從冷藏環(huán)境中取出試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及待測標本所需微孔條,置室溫平衡30分鐘后再行測試,余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。
植物赤霉素(GA)ELISA檢測試劑盒操作步驟:
1,試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。
2,實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3,不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4,使用一次性的吸頭以免交叉污染,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5,使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6,洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
7,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
8,嚴格按照說明書的操作方法進行操作。說明書以英文說明書為主。
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒實驗方法注意事項:
1.不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照所用試劑盒嚴格操作,否則容易產(chǎn)生檢測結(jié)果的不確定性。
2.若不同批號人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應(yīng)時間的誤差,做大量標本時,一孔和后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4.臨界值附近標本波動為正?,F(xiàn)象,任何試劑均不可避免。可以考慮將標本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時樣品量誤差,對于陰或很陽的標本影響不大,但對閾值附近的標本影響大,建議校對加樣器。
植物赤霉素(GA)ELISA試劑盒液體類標本:
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
1)血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/ 分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并 放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5)組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
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