48t/96t 人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
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產(chǎn)品名稱(chēng):48t/96t 人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
產(chǎn)品型號(hào):48t/96t
產(chǎn)品廠(chǎng)商:上海古朵生物科技有限公司
簡(jiǎn)單介紹
48t/96t 人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng)的詳細(xì)介紹
中文名:人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒
別名:人抗透明帶抗體(aZP)ELISA Kit
供應(yīng)商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2-8℃
有效期:6個(gè)月
范圍:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷。
特點(diǎn):敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便。
用途:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體樣本中相關(guān)含量或活性。
檢測(cè)種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨ELISA試劑盒等種屬。
常見(jiàn)ELISA試劑盒:白介素、選擇素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、干擾素、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、趨化因子、細(xì)胞因子受體、粘附分子、生長(zhǎng)因子、凋亡因子等等。
樣本類(lèi)型:適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞上清、組織勻漿等樣本。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:
1. ELISA試劑盒及待測(cè)樣本
2. 酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)
3. 移液器,EP管及一次性吸頭
4. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
5. 吸水紙
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng) 標(biāo)本要求:
1. 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成應(yīng)再次離心。
3. 尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞:
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6. 組織標(biāo)本:
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 .
8.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒性能:
1.樣品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%和11%
檢測(cè)范圍:
0.2IU/L - 6IU/L
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒操作步驟:
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,依次進(jìn)行稀釋數(shù)倍。
加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍(48T 的20 倍)濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
人抗透明帶抗體(aZP)ELISA試劑盒注意事項(xiàng):
1.不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同,務(wù)必按照人抗透明帶抗體(aZP)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格操作,否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
2.若不同批號(hào)人抗透明帶抗體(aZP)ELISA檢測(cè)試劑盒的不同組分(A液或酶工作液),或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用,有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高,花板等情形。
3.反應(yīng)時(shí)間的誤差,做大量標(biāo)本時(shí),一孔和后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
4.臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正?,F(xiàn)象,任何試劑均不可避免??梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時(shí)樣品量誤差,對(duì)于陰或很陽(yáng)的標(biāo)本影響不大,但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響大,建議校對(duì)加樣器。
ELISA試劑盒的儲(chǔ)存及有效期:
1. 未開(kāi)封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請(qǐng)注意,收到試劑盒后請(qǐng)盡快將TMB 洗滌液,終止液保存于4℃,其他試劑保存于-20℃。
2. 使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,開(kāi)封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
注意:
試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸,按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在次實(shí)驗(yàn)后1個(gè)月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過(guò)期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn),保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
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